Бүтээгдэхүүн
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR 2019-nCoV илрүүлэх хэрэгсэл
Хүлээгдэж буй хэрэглээ
Энэхүү иж бүрдэл нь хоолойн арчдас, хамар залгиурын арчдас, гуурсан хоолой угаах шингэн, цэр зэргийг ашиглан шинэ коронавирус (2019-nCoV)-ийг чанарын хувьд илрүүлэхэд ашигладаг. Энэ бүтээгдэхүүний илрүүлэлтийн үр дүн нь зөвхөн эмнэлзүйн лавлагаа бөгөөд үүнийг цорын ганц байдлаар ашиглаж болохгүй. Эмнэлзүйн оношлогоо, эмчилгээний нотолгоо. Өвчтөний эмнэлзүйн илрэл болон бусад лабораторийн шинжилгээнүүдтэй хослуулан нөхцөл байдлын цогц шинжилгээг хийхийг зөвлөж байна.
Хяналтын зарчим
Энэхүү иж бүрдэл нь нэг үе шаттай RT-ПГУ-ын технологи дээр суурилдаг.Үнэн хэрэгтээ 2019 оны шинэ коронавирусын (2019-nCoV) ORF1ab болон N генийг олшруулах зорилтот бүс болгон сонгосон.Тусгай праймерууд болон флюресцент датчикууд (N генийн датчикууд нь FAM, ORF1ab датчикууд нь HEX гэсэн шошготой) дээжинд 2019 шинэ төрлийн коронавирусын РНХ илрүүлэх зориулалттай.Энэхүү хэрэгсэлд дээж цуглуулах, РНХ болон ПГУ-ын олшруулалтын үйл явцыг хянах, улмаар хуурамч сөрөг үр дүнг бууруулах дотоод хяналтын илрүүлэх системийг (CY5 гэж тэмдэглэсэн дотоод хяналтын генийн датчик) багтаасан болно.
Үндсэн бүрэлдэхүүн хэсгүүд
| Бүрэлдэхүүн хэсгүүд | Эзлэхүүн（48Т/иж бүрдэл） |
| RT-ПГУ-ын урвалын уусмал | 96 мкл |
| nCOV праймер TaqMan пробемикс (ORF1ab, N Gene, RnaseP Gene) | 864 мкл |
| Сөрөг хяналт | 1500 мкл |
| nCOV эерэг хяналт（l ORF1ab N ген） | 1500 мкл |
Өөрийнхөө урвалжууд: РНХ олборлох эсвэл цэвэршүүлэх урвалжууд.Сөрөг/эерэг хяналт: Эерэг хяналт нь зорилтот фрагмент агуулсан РНХ, харин сөрөг хяналт нь нуклейн хүчилгүй ус юм.Ашиглалтын явцад тэдгээр нь олборлолтод оролцох ёстой бөгөөд халдвартай гэж үзнэ.Тэдгээрийг зохих журмын дагуу зохицуулж, устгах ёстой.
Дотоод лавлагаа ген нь хүний RnaseP ген юм.
Хадгалах нөхцөл, дуусах хугацаа
-20±5℃, 5-аас дээш удаа давтан хөлдөөх, гэсгээхээс зайлсхийх, 6 сарын хугацаанд хүчинтэй.
Холбогдох хэрэгсэл
FAM / HEX / CY5 болон бусад олон сувгийн флюресцент ПГУ-ын хэрэгсэлтэй.
Сорьцын шаардлага
1.Хэрэглэх сорьцын төрөл: хоолойн арчдас, хамар залгиурын арчдас, гуурсан хоолой угаах шингэн, цэр.
2. Сорьц цуглуулах (асептик арга)
Залгиурын арчдас: Гүйлсэн булчирхай болон залгиурын арын ханыг хоёр арчдасаар нэгэн зэрэг арчиж, дараа нь арчдасны толгойг дээж авах уусмал агуулсан туршилтын хоолойд дүрнэ.
Цэр: Өвчтөн гүнзгий ханиалгасны дараа ханиалгасан цэрийг дээж авах уусмал агуулсан шураг таглаатай туршилтын хоолойд цуглуулах;Гуурсан хоолой угаах шингэн: Эмнэлгийн мэргэжилтнүүдийн дээж авах.3.Дээжийг хадгалах, тээвэрлэх
Вирус тусгаарлах болон РНХ-ийн шинжилгээнд зориулсан дээжийг аль болох хурдан турших хэрэгтэй.24 цагийн дотор илрүүлж болох сорьцыг 4℃ температурт хадгалах боломжтой;24-ийн дотор илрүүлэх боломжгүй
цагийг -70 ℃ ба түүнээс доош температурт хадгалах ёстой (хэрэв -70 ℃ хадгалах нөхцөл байхгүй бол тэдгээрийг хадгалах ёстой.
-20 хэмийн хөргөгчинд түр хадгална).Сорьцыг тээвэрлэх явцад олон удаа хөлдөөх, гэсгээхээс зайлсхийх хэрэгтэй.Сорьцыг цуглуулсны дараа аль болох хурдан лабораторид илгээнэ.Хэрэв дээжийг хол зайд тээвэрлэх шаардлагатай бол хуурай мөс хадгалахыг зөвлөж байна.
Туршилтын аргууд
1 Дээж боловсруулах ба РНХ олборлолт (дээж боловсруулах талбай)
РНХ гаргаж авахын тулд 200 мкл шингэн дээж авахыг зөвлөж байна.Холбогдох хандалтын алхмуудыг арилжааны РНХ олборлох иж бүрдлийн заавраас үзнэ үү.Сөрөг ба сөрөг аль аль нь
олборлолтод энэ иж бүрдэл дэх хяналтууд оролцсон.
2 ПГУ-ын урвалж бэлтгэх (урвалж бэлтгэх хэсэг)
2.1 Багцаас бүх бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг аваад тасалгааны температурт гэсгээж, холино.Хэрэглэхийн өмнө хэдхэн секундын турш 8000 эрг / мин-ээр центрифуг хийх;шаардлагатай урвалжийн хэмжээг тооцоолж, урвалын системийг дараах хүснэгтэд үзүүлсний дагуу бэлтгэнэ.
| Бүрэлдэхүүн хэсгүүд | N порц (25µl систем) |
| nCOV праймер TaqMan пробемикс | 18 мкл × Н |
| RT-ПГУ-ын урвалын уусмал | 2 мкл × N |
| *N = туршилт хийсэн дээжийн тоо + 1 (сөрөг хяналт) + 1 (nCOVэерэг хяналт) | |
2.2 Бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг сайтар хольсны дараа хоолойн ханан дээрх бүх шингэнийг хоолойн ёроолд буулгахын тулд богино хугацаанд центрифуг хийж, дараа нь 20 мкл олшруулах системийг ПГУ-ын хоолойд хийнэ.
3 Дээж авах (сорьц бэлтгэх хэсэг)
Олборлолтын дараа сөрөг ба эерэг хяналтын 5 мкл нэмнэ.Шалгах дээжийн РНХ-ийг ПГУ-ын урвалын хоолойд нэмнэ.
Хоолойг сайтар таглаад олшруулалтыг илрүүлэх хэсэгт шилжүүлэхийн өмнө хэдхэн секундын турш 8000 эрг/мин хурдаар центрифуг хийнэ.
4 ПГУ-ын олшруулалт (олшруулсан илрүүлэх хэсэг)
4.1 Урвалын хоолойг багажийн дээжийн нүдэнд байрлуулж, параметрүүдийг дараах байдлаар тохируулна.
| үе шат | Цикл тоо | Температур(°C) | Цаг хугацаа | цуглуулгасайт |
| Урвуутранскрипци | 1 | 42 | 10мин | - |
| Урьдчилан денатурациn | 1 | 95 | 1мин | - |
| Цикл | 45 | 95 | 15 секунд | - |
| 60 | 30-аад он | Өгөгдөл цуглуулах |
Багаж илрүүлэх сувгийн сонголт: Флюресценцийн дохионы FAM、HEX、CY5 сувгийг сонгоно.Лавлах флюресцент ҮГҮЙ бол ROX-ийг бүү сонго.
5 Үр дүнгийн шинжилгээ (Тохируулга хийхдээ багаж тус бүрийн туршилтын зааврыг үзнэ үү)
Урвалын дараа үр дүнг хадгална.Шинжилгээ хийсний дараа үндсэн шугамын эхлэл, төгсгөлийн утга, босго утгыг зургийн дагуу тохируулна (хэрэглэгч бодит нөхцөл байдлын дагуу тохируулах боломжтой, эхлэлийн утгыг 3~15, төгсгөлийн утгыг тохируулж болно) 5~20, тохируулга) логарифмын графикт Цонхны босгон дээр босго шугам нь логарифмын үе шатанд, сөрөг хяналтын олшруулалтын муруй нь шулуун шугам буюу босго шугамаас доош).
6 Чанарын хяналт（Туршилтанд процедурын хяналтыг оруулсан） Сөрөг хяналт:FAM, HEX, CY5 илрүүлэх сувгийн олшруулалтын тодорхой муруй байхгүй.
COV эерэг хяналт: FAM болон HEX илрүүлэх сувгуудын олшруулалтын муруй, Ct утга≤32, гэхдээ CY5 сувгийн олшруулалтын муруй байхгүй;
Дээрх шаардлагыг нэг туршилтанд нэгэн зэрэг хангасан байх ёстой;эс бөгөөс туршилт хүчингүй бөгөөд дахин хийх шаардлагатай.
7 Үр дүнг тодорхойлох.
7.1 Туршилтын дээжийн FAM болон HEX сувагт олшруулалтын муруй байхгүй эсвэл Ct утга> 40, CY5 сувагт олшруулалтын муруй байгаа бол 2019 оны шинэ коронавирус (2019-nCoV) байхгүй гэж дүгнэж болно. дээж дэх РНХ;
.2 Хэрэв шинжилгээний дээж нь FAM болон HEX сувгууд дээр илт олшруулалтын муруйтай бөгөөд Ct утга нь ≤40 байвал дээжийг 2019 оны шинэ коронавирусын (2019-nCoV) эерэг гэж дүгнэж болно.
7.3 Туршилтын дээж нь зөвхөн FAM эсвэл HEX-ийн нэг сувагт тодорхой олшруулалтын муруйтай, Ct утга нь ≤40, нөгөө сувагт олшруулалтын муруй байхгүй бол үр дүнг дахин шалгах шаардлагатай.Хэрэв дахин туршилтын үр дүн нийцэж байвал дээжийг шинэ сорилын хувьд эерэг гэж дүгнэж болно
коронавирус 2019 (2019-nCoV).Хэрэв дахин шинжилгээний хариу сөрөг гарсан бол дээж 2019 оны шинэ коронавирусын (2019-nCoV) сөрөг гарсан гэж дүгнэж болно.
Эерэг үнэлгээний үнэ цэнэ
ROC муруй аргыг иж бүрдэлийн CT-ийн лавлагааны утгыг тодорхойлоход ашигладаг бөгөөд дотоод хяналтын лавлагааны утга нь 40 байна.
Туршилтын үр дүнгийн тайлбар
1.Туршилт бүрийг сөрөг болон эерэг хяналтаар шалгана.Хяналт нь чанарын хяналтын шаардлагыг хангасан тохиолдолд л туршилтын үр дүнг тодорхойлж болно
2.FAM болон HEX илрүүлэх сувгууд эерэг байх үед CY5 сувгийн (дотоод хяналтын суваг) үр дүн нь системийн өрсөлдөөний улмаас сөрөг байж болно.
3.Дотоод хяналтын үр дүн сөрөг байвал туршилтын хоолойн FAM болон HEX илрүүлэх сувгууд мөн сөрөг байвал систем идэвхгүй болсон эсвэл буруу ажиллагаатай бол туршилт хүчингүй болно.Тиймээс дээжийг дахин шалгах шаардлагатай.
